Speaker A
Alors, soit sur tube sec ou la tube hépariné et le jeûne, donc il doit être 8h, 8h du jeûne ou 10h de jeûne après un repas carné et bien sûr en cas d'effort physique. Alors la porciné, si par exemple
Présentation détaillée des méthodes de dosage de la créatinine et des normes pour le bilan rénal en biochimie clinique.
Key Takeaways
- Le jeûne est essentiel pour éviter les faux positifs dans le dosage de la créatinine.
- La méthode de référence est la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG).
- La méthode cinétique de Jaffé est privilégiée en laboratoire pour son automatisation et sa réduction des interférences.
- Les méthodes enzymatiques offrent une alternative précise avec des réactions spécifiques.
- Les normes de créatinine varient selon le sexe, l'âge et l'activité physique.
Summary
- Importance du jeûne de 8 à 10 heures avant le prélèvement pour éviter les faux positifs liés à la consommation de viande.
- Stabilité des échantillons de créatinine : 4 jours à température ambiante, 7 jours au réfrigérateur.
- Présentation des méthodes de dosage de la créatinine : méthode de référence CPG et méthodes de Jaffé.
- Description des différentes variantes de la méthode de Jaffé : point final sans et avec protéinisation, et méthode cinétique.
- Inconvénients des méthodes sans protéinisation dues aux interférences avec d'autres substances comme les corps cétoniques, glucose, bilirubine.
- Avantages de la méthode cinétique de Jaffé, notamment son automatisation et sa capacité à réduire les interférences.
- Présentation des méthodes enzymatiques colorimétriques (méthode de Trinder) et en UV pour doser la créatinine.
- Explication détaillée des réactions enzymatiques impliquées dans les méthodes enzymatiques.
- Normes de créatinine selon le sexe, l'âge, et l'impact de l'exercice physique sur les résultats.
- Introduction au dosage de l'urée et ses variations physiologiques.
Chapters
- 00:00Préparation du prélèvement et conditions de jeûne
- 01:24Introduction aux méthodes de dosage de la créatinine
- 02:52Méthode de Jaffé : principes et variantes
- 04:06Inconvénients et interférences des méthodes colorimétriques
- 05:18Méthode de Jaffé avec protéinisation
- 06:45Méthode cinétique de Jaffé et automatisation
- 08:02Méthodes enzymatiques colorimétriques et en UV
- 11:28Normes de créatinine et facteurs influençant les résultats
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Speaker A
le patient, il prend une, il consomme de la viande la veille parce qu'il consomme de la viande, donc de préférence, il doit être à jeun 10h, 10h pour éliminer les faux positifs parce que les viandes contiennent
Speaker A
une grande quantité en protéines. Du coup, pour éviter les faux positifs, alors soit un jeûne de 8h ou à 10h. Alors maintenant, une fois qu'on fait le prélèvement, le prélèvement est stable 4 jours, 4 jours seulement à température
Speaker A
ambiante, donc au laboratoire, donc il est stable 4 jours. Si on le met dans le frigo, donc à +4 degrés, il est stable 7 jours, une semaine. Maintenant, on passe aux méthodes de dosage, comment on dose la créatinine.
Speaker A
Au laboratoire, plusieurs méthodes. Alors, en biochimie, on doit connaître les méthodes de référence, surtout pour les résidents, ils doivent savoir les méthodes de référence, les méthodes qu'on utilise couramment au laboratoire, leurs avantages, inconvénients, etc. Alors la méthode de référence
Speaker A
pour doser la créatinine, c'est la CPG. CPG, c'est quoi ? C'est la chromatographie couplée à la phase gazeuse, elle est couplée à la spectrométrie de masse après dilution isotopique, c'est la méthode de référence. Maintenant, la méthode laboratoire
Speaker A
c'est les méthodes de Jaffé, méthodes de Jaffé. Alors c'est une méthode colorimétrique, on va avoir une couleur. Alors les méthodes de Jaffé, la méthode de Jaffé en point final, méthode de Jaffé cinétique, alors point final sans protéinisation et
Speaker A
point final avec protéinisation. Alors le point final, on va rajouter les réactifs, on va attendre un bon moment, on va lire point final. Sans protéinisation, on ne va pas éliminer les protéines, donc cette méthode elle
Speaker A
est abandonnée, elle est abandonnée. Alors le principe, c'est quoi ? Au milieu alcalin, donc le photomate il va aspirer du NaOH, c'est le R1, et le R2 c'est le picrate ou l'acide picrique. Alors milieu alcalin, c'est-à-dire en
Speaker A
présence de NaOH, la créatinine, donc la créatinine elle va se combiner, elle va former un complexe avec quoi ? Avec l'acide picrique, elle va former un complexe. La couleur du complexe, c'est jaune orangé, c'est du jaune orangé. Alors
Speaker A
le complexe il va absorber à 520 nanomètres, l'intensité de coloration est proportionnelle à la concentration de la créatinine dans l'échantillon. Lorsqu'on a la couleur du tube jaune orangé, plus la couleur est très foncée, plus l'échantillon contient de créatinine, plus elle
Speaker A
est, elle n'est pas claire, plus la concentration est élevée. Pour ce qui concerne sans protéinisation, mais elle est abandonnée. Alors, pourquoi elle est abandonnée ? Parce que des inconvénients. Quels sont les
Speaker A
inconvénients ? C'est une réaction non spécifique, non spécifique à des interactions, c'est-à-dire il y a d'autres substances qui vont réagir avec le réactif, l'acide picrique. Les substances qui vont réagir avec l'acide picrique, par exemple les corps cétoniques, acétoacétate, beaucoup plus les
Speaker A
protéines, le glucose, pyruvate, acide gras, acide ascorbique, certains antibiotiques comme les céphalosporines, les céphalosporines, céfoxitine, bilirubine, etc. Donc ces substances vont réagir avec l'acide picrique, donc elles vont donner une couleur, la couleur. Donc si
Speaker A
la couleur est très foncée, on va dire que le patient a une concentration élevée en créatinine, alors que c'est faux. Donc par exemple, si l'acétoacétate réagit avec l'acide picrique, on aura un
Speaker A
faux positif, la concentration, c'est-à-dire on aura une concentration très élevée alors que ce n'est pas la créatinine elle-même, d'accord ? Par exemple, si la bilirubine est en concentration élevée, on aura un faux négatif. Voilà, par exemple, ça c'est la
Speaker A
différence. Alors maintenant, la deuxième technique, c'est définit en point final avec protéinisation, avec protéinisation, c'est-à-dire on va éliminer les protéines par quoi ? Généralement, on va utiliser l'acide trichloracétique, l'acide trichloracétique, on peut utiliser aussi le stannate de sodium et l'acide sulfurique,
Speaker A
le H2SO4. Mais cette méthode, les inconvénients, c'est qu'elle est longue, ça fait long, donc elle ne permet pas de l'utiliser en cas d'urgence, elle est longue, on a besoin d'une quantité élevée de sérum et
Speaker A
elle est non automatisable, c'est-à-dire elle est effectuée manuellement, ce n'est pas dans un automate. Alors la troisième technique, c'est le Jaffé cinétique, cinétique, c'est-à-dire on va suivre l'évolution cinétique, on va sans protéinisation, on ne va pas utiliser l'acide chloracétique. Alors comme le
Speaker A
principe cinétique, c'est que tous les composés qui réagissent avec le réactif de Jaffé ne le font pas à la même vitesse. Par exemple, l'acétoacétate, il va réagir avant la créatinine, c'est une réaction très rapide entre l'acétoacétate et l'acide picrique. Donc la
Speaker A
créatinine, elle ne va pas réagir maintenant avec le picrate, après les autres composés, par exemple les protéines, glucose, pyruvate, acide ascorbique, etc., ils vont réagir bien après la créatinine. Ce n'est pas pour ça qu'on va utiliser deux lectures.
Speaker A
Au laboratoire, on va utiliser deux lectures : une lecture de concentration à 10 secondes et 80 secondes, en faire la moyenne. Maintenant, l'avantage de la technique, c'est qu'elle est automatisable, on va doser la créatinine sur un automate sans déprotéinisation, on va éliminer les
Speaker A
interférences, une bonne linéarité. La linéarité, elle est 250 mg le maximum. Par exemple, si la concentration de la créatinine est très élevée, par exemple on va dire 170 mg par litre, dans ce cas, on
Speaker A
va faire une dilution, on va faire une dilution. Le domaine de mesure, domaine de mesure, c'est-à-dire entre la sensibilité, donc c'est un intervalle entre la sensibilité et le maximum, la linéarité. Donc il faut être dans le domaine de
Speaker A
mesure. Voilà. Alors la troisième technique de dosage, c'est les méthodes enzymatiques. Les méthodes enzymatiques, des méthodes enzymatiques colorimétriques, colorimétriques, c'est-à-dire on va utiliser une couleur, et les méthodes enzymatiques en UV. Alors les méthodes enzymatiques colorimétriques, ce qu'on appelle les méthodes de Trinder,
Speaker A
Trinder, c'est-à-dire on va utiliser la peroxydase avec l'oxygène, donc par exemple la créatininase, donc c'est-à-dire elle va oxyder, donc créatinine et peroxydase. Alors la première méthode colorimétrique, la créatinine, elle va subir une, c'est-à-dire une, elle va être hydrolysée
Speaker A
par une amidohydrolase. Qu'est-ce qu'on aura ? On aura une créatine, une créatine. Donc créatinine, une créatine, la créatine, elle va être hydrolysée par la créatinase pour donner l'urée et le sarcosine, sarcosine. Alors la sarcosine, on va rajouter un deuxième réactif
Speaker A
qui contient de la sarcosine oxydase. Donc en présence d'oxygène, la sarcosine donne glycine et formaldéhyde plus H2O2. H2O2, on va utiliser H2O2 pour oxyder un chromogène qui est réduit. Le chromogène est réduit en présence de peroxydase. Le chromogène réduit généralement utilisé, c'est le
Speaker A
para-aminophénol. Le chromogène réduit, il est incolore. Lorsqu'il sera oxydé, il va devenir rouge, va nous donner une couleur rouge. C'est la quinonimine. La coloration, elle est mesurée à 505 nm, donc
Speaker A
l'intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration de la créatinine dans le sang. Voilà pour ce qui concerne colorimétrique. Maintenant, pour les méthodes enzymatiques en UV, il y a deux techniques : soit on utilise la créatininase, soit on utilise
Speaker A
la créatinine désaminase. Alors le principe, donc c'est le même principe que la première. Donc la créatinine, par une créatininase, on aura la créatine, mais au lieu d'hydrolyser la créatine en urée et
Speaker A
sarcosine, on va la phosphoryler, on va la phosphoryler par la kinase pour donner la créatine phosphate plus ADP. Le réactif va con...
Speaker A
plusctydrogénasct avec oxydation le le nade et la on va la mesurer 340 qui dit 340 c'està dire on va mesurer la concentration le net h H+ et puisque il va disparaître donc on va suivre la diminution l'ado parce qu'il va
Speaker A
disparaître donc la diminution de laado elle est proportionnelle à la concentration de la créatinine dans le sang maintenant la deème technique méthode enzymatique la la méthode enzymatique en UV en utilisant la créatinine désaminase donc la créatinine désaminase had donc
Speaker A
qui dit desaminas c'està-dire on va enlever un ammoniaque on va enlever de l'ammoniac donc on va enlever de l'ammoniac et on aura un mthyl un mthyl é dentoïne alors l'ammoniaque had l'ammoniac had qu'on va le doser alors l'ammoniaque on va le doser soit en UV
Speaker A
soit la réaction colorémétrique le V on va utiliser la réaction alphaacyoglutarate glutamydrogenal glutamate avec disparition de NAD h on va suivre la diminution de la DO à 340 nanomè ou là une réaction colorométrique c'està-dire l'ammoniaque plus on va
Speaker A
utiliser un un colorant c'estàd bleu de bromophenol mais la coloration bleue voilà maintenant quelles sont les normes la créaltinine donc les normes de la créaltinine chez l'adulte donc entre chez la femme et l'homme se diffère alche parce que l'homme une masse
Speaker A
musculaire très élevée par rapport à la femme donc du coup lesorme chez l'homme elle est entre 7 et 13 chez la femme entre 6 à 12 mg par litre pour la créatinine chez l'enfant entre 2 à 5 mg
Speaker A
par litre chez les nourrons 3 à 5 mg par litre voilà donc il faut c'est c'est très important de connaître le facteur de conversion alors entre micromol et le milligram donc un micromolle est égal 1 mg par litre x 8,8 voilà là c'est très
Speaker A
important pour ce qui concerne les variations physiologiques alors les variations physiologiques alors que la créatinine elle est indépendant de l'alimentation mais sauf au cas d'alimentation carnée il y a une élévation plus en moins euh un autre point donc si par exemple le patient il
Speaker A
fait un exercice physique l'exercice physique il va augmenter de de 20 % de la créatinine donc c'est pour ça il faut éviter euh le sport euh aussi avec l'âge euh plus on avance euh plus qu'on avance donc on aura une euh une augmentation
Speaker A
faible alche parce que la créatinine elle est euh euh elle n'est pas excrétée c'està-dire il y a une diminution de son excrétion et bien sûr l'IT il y a augmentation de la masse la masse musculaire qui explique l'augmentation de la crétine
Speaker A
chez certain éthnie ou chez le nouveau- nez avec la femme enceinte il y a une diminution de la créatinine alors chez la femme onencein pourquoi parce qu'il a une hypervolumie et pour les les variations pathologiques la créatinine elle
Speaker A
augmente en cas d'insuffisance rénale d'insuffisance rénale et elle est utilisé pour pour pour suivre la progression de l'insuffisance rénale et aussi elle est utilisée pour le calcul de débit de filtration glomérulaire alors à noter que la relation entre la créatinine et le DFG
Speaker A
n'est pas linéaire mais h hyperbole inverse hyperbole inverse plus la créaltinine augmente plus le DF diminue voilà maintenant pour ce qui concerne l'uré alors l'uré elle la formule elle est ainsi donc co NH2 NH2 donc l'uré min c'est le produit de catabolisme des
Speaker A
protéines et et c'est la forme principale d'élimination de l'azote donc pour l'organisme pour pour pour éliminer l'azote qu'est-ce qu'il va faire il va synthétiser le riz le ré par le cycle de le r la Sy elle est au niveau du foie
Speaker A
euh par le cycle de luré à partir de l'ammoniaque et lapartate alors il est éliminé par filtration glomurulaire et et réabsorption tubulaire le prélèvement le patient doit être un jeun de 8h euh sur sérum ou plasma hpariné à
Speaker A
Notter qu'il faut éviter les fluorures les anticoagulants fluorures parce que l le flu il va inhiber l'urias et éviter aussi les ions d'ammonium alors pour les méthodes de dosage luré des méthodes colorométriques à la Dame des acé monoxy c'est est
Speaker A
abandonné les méthodes enzymatiques à l'urias l'urias donc donc il s'agit de de faire deux étapes hydrolyse de luré donc donc le par l'urias en CO2 et l'ammoniac pris on va doser l'ammoniac l'ammoniac par trois méthodes de principes différents soit
Speaker A
colorémétrique bertello c'està-dire l'ammoniaque plus phénol plus hypochloride de sodium plus nitroproccian de sodium qui est un catalyseur donc qu'est-ce qu'on aura on aura un endophinol bleu qui est mesuré à 630 nanom ou là on va doser l'ammoniac grâce à une méthode UV donc enzymatique
Speaker A
en UV c'est la méthode de référence donc l'ammoniaque plus alpacytoglutarate sur l'action du glutamate deshydrogénuse on aura le glutamate avec disparition de NH donc on va suivre diminution de la DO à 340 et la dernière le 3ème type c'est par
Speaker A
conductométrie en utilisant un électrode spécifique qui va doser directement l'ammoniaque euh par euh et et et qui entraîne une modification de potentiel du milieu et le signal va donner directement la concentration de l'uré maintenant les normes t l'uré chez la
Speaker A
adulte entre 0,15 à 0,50 chez l'enfant 0,15 0,25 chez les nourrissant 0,5 à 0,15 maintenant les variation physiologique donc on aura diminution chez la femme enceinte par par une hyperhydratation et augmentation avec l'âge et l'alimentation riche en protéines alors
Speaker A
pour les variations pathologiques euh soit en cas de hyperhydratation la diminution cas d'hyperhydratation soit déficit enzymatique qui touche l'oriogénèse insuffence hépatique malnutrition ou acidose ala on a une diminution de l'urée en cas d'acidose métabolique parce que l'ammoniaque au
Speaker A
lieu le cycle de l'uré pour synthétiser l'uré l'ammoniaque il va dévier pour former le NH4 NH4Cl dans le rein voilà et l'uré il va augmenter aussi dans le cas euh d'atteinte euh d'atteinte glomérulaire c'està-dire on va en cas
Speaker A
d'insuffisance rénal fonctionnel en cas de déshydratation en cas de septicémie en cas de grandes brûlure et aussi augmentation en cas de catabolis protéque en cas de diabète voilà alors le dosage de l'uré il n'a pas d'intérêt en pratique mais l'intér
Speaker A
sauf s'il est associé au dosage de la créatinine alche parce qu'il est moins spécifique du fait de sa sensibilité à l'alimentation par contre la créatinine il est indépendant de l'alimentation et euh et euh il dépend aussi du catabolisme euh protiidique endogène
Speaker A
voilà et il faut savoir que l'urée il augmente en premier en cas d'insufficiance rénale euh en cas d'insuffance rénale etq voilà voilà pour ce qui concerne les méthodes de dosage et les variations physiopathologiques euh du Bilon rénal uré et la
Speaker A
créatinine y
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